DNA末端粘转平试剂盒

详细内容

产品名称：DNA末端粘转平试剂盒
产品英文名称：DNA Blunting Kit
产品分类：分子生物学试剂
纯度/规格：30T
保存：-20℃，有效期1年。

产品简介：
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3′到5′的聚合酶活性和5′到3′外切酶活性,将3′或5′突出的DNA－－-pian段转化成平末端,用于克隆工作。

产品特点:
1.简单,精心优化过的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA载体。

使用方法:
1. DNA－－-pian段的准备:
无论是来源Taq,Tth,T7,Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA－－-pian段,还是用限制性内切酶制备的DNA－－-pian段,粘转平之均需要将DNA沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA的方法包括经典的盐/纯沉淀法,离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 设置粘转平(Polishing)反应:
在一个干净的离心管中,分别加入
3′或5′突出的DNA－－-pian段    10-500ng
2×Polishing Buffer    25μL
Pfu DNA polymerase    1μL
补水到    50μL
72℃保温2小时。

注意:如果不使用热盖式PCR 仪器加热,则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3.反应后处理
粘转平反应后,样品可以放-20℃长期保存,也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系,一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性,所以不必去除。但文献报道,去除后连接效率更高。



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原创作者：免费西甲联赛直播吧

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